外周血单个核细胞（PBMC）是免疫研究中的“宝藏”，主要由淋巴细胞（T细胞、B细胞、NK细胞）和单核细胞组成。要利用这些细胞进行疾病机制研究、疫苗评估或细胞治疗，首要前提是准确评估它们的活性（存活率）与功能。这两者相辅相成：细胞必须活着才能发挥功能，而功能状态则反映了细胞的“战斗力”。
一、细胞活性评估：确保细胞“活着”
细胞活性是功能研究的基础。如果样本中死细胞过多，不仅无法反映真实的免疫状态，死细胞释放的胞内物质还可能干扰后续实验。
1.台盼蓝拒染法
这是传统、快速的方法。台盼蓝染料不能透过活细胞的完整细胞膜，而死细胞会被染成蓝色。通过血球计数板在显微镜下观察，可以计算出活细胞的比例。该方法成本低、操作快，适合在分离细胞后立即进行质控。
2.流式细胞术结合活性染料
这是目前金标准方法之一。使用7-AAD或PI（碘化丙啶）等核酸染料，它们同样不能进入活细胞，但在细胞膜受损时能嵌入DNA发出荧光。通过流式细胞仪可以精确量化样本中活细胞、死细胞和凋亡细胞的比例，结果更为客观。
二、细胞功能评估：检验细胞“战斗力”
活细胞的质量不仅体现在“活着”，更在于其执行免疫任务的能力。根据研究目的，可以从不同维度进行功能评估。
1.免疫功能的基础——增殖能力
当淋巴细胞遇到抗原或丝裂原刺激后，会发生克隆增殖。评估增殖的方法包括：
CCK-8/MTT法：通过检测活细胞线粒体中的代谢酶活性，间接反映细胞数量，适合高通量检测。
CFSE标记法：利用流式检测荧光染料随细胞分裂而被稀释的现象，可以直观地看到增殖了几代细胞。
EdU掺入法：检测新合成的DNA，灵敏度高。
2.核心效应功能——细胞因子分泌
细胞因子是免疫细胞传递信号的“语言”。检测PBMC在静息或刺激后分泌的细胞因子，是评估其功能状态的核心指标。
ELISA：检测细胞培养上清中总的细胞因子蛋白含量。
ELISpot：灵敏度高，能在单细胞水平上统计分泌特定细胞因子（如IFN-γ）的细胞频率，常用于疫苗临床试验中的T细胞应答评估。
流式微球阵列：可同时检测Th1/Th2/Th17等多种细胞因子，实现多重定量。
3.精细的亚群功能——流式细胞术分析
利用流式细胞术结合表面标记和胞内染色，可以精准定位是哪种细胞在执行功能。例如，通过检测CD69、CD137、CD107a等活化或脱颗粒标志物，可以判断T细胞或NK细胞是否被激活并具有杀伤潜能。
4.功能——杀伤能力
对于细胞毒性T细胞或NK细胞，其最终使命是清除靶细胞。铬释放实验或基于流式的杀伤实验，通过将效应细胞（PBMC）与荧光标记的靶细胞共培养，直接观察靶细胞的死亡比例，这是评估细胞毒性功能的直接证据。
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更新时间：2026-03-09
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