TCR人体组织样本的采集、运输与冻存标准流程

　　TCR人体组织样本的全流程标准化是获得高质量免疫组库数据的前提。从采集到冻存，每一环节的规范操作，既能保障样本活性与核酸完整性，也让多中心研究数据可比、可重复。医疗机构与科研平台应严格执行本流程，为TCR基础研究与临床转化提供可靠样本支撑。

 

　　一、样本采集规范

 

　　采集前完成伦理审批与知情同意，核对样本编号、类型、部位、疾病信息，做到一人一管一码。优先选取新鲜手术切除或穿刺组织，样本量≥5mg，大小约黄豆粒（0.5cm³），避免脂肪、坏死与结缔组织。

 

　　1.无菌操作：使用无RNase器械与冻存管，全程低温快速处理，离体至稳定化不超过15分钟。

 

　　2.组织处理：预冷PBS轻洗血污，修剪为≤0.5cm小块，保证保存液充分渗透。

 

　　3.抗凝要求：血液样本用EDTA抗凝管，严禁肝素，避免干扰建库。

 

　　4.即时稳定：立即投入组织保护液，全浸没；或直接液氮速冻。

 

　　二、样本运输标准

 

　　运输核心是控温、密封、防震，防止温度波动与样本破损。

 

　　1.短期运输（≤48小时）：组织浸入组织保护液，4℃冰袋运输，泡沫箱加透气孔，避免冻结。

 

　　2.长期/远程运输：液氮速冻后干冰运输，温度≤-78℃，按每24小时5–8kg配备干冰，样本管双层密封、缓冲固定，防止挤压破裂。

 

　　3.信息与时限：箱外标注样本类型、温度、紧急联系；全程温度记录，组织样本运输不超过48小时。

 

　　4.禁忌：禁止常温放置、反复冻融、与其他样本混放。

 

　　三、样本冻存与管理

 

　　冻存以快速降温、分装保存、避免反复冻融为原则。

 

　　1.速冻处理：新鲜组织离体后迅速液氮速冻10分钟以上，转入-80℃冰箱。

 

　　2.梯度冻存（细胞悬液）：按培养基/血清:DMSO=9:1配制冻存液，程序降温盒-80℃过夜，次日转入液氮长期保存。

 

　　3.保存条件：-80℃短期（≤6个月）；液氮（-196℃）长期，稳定性最佳。

 

　　4.分装原则：大样本分多管，减少取用次数，严禁反复冻融。

 

　　5.台账管理：登记编号、采集时间、处理方式、保存位置、温度曲线，实现全流程溯源。

 

　　四、质量控制要点

 

　　1.采集：离体时间越短越好，剔除坏死组织，无RNase污染。

 

　　2.运输：温度稳定，包装牢固，单据齐全，按时送达。

 

　　3.冻存：速冻到位，分装明确，定期监测冰箱/液氮罐温度。

 

　　4.验收：检查包装、温度、样本状态，合格入库，不合格标记并重新采集。